Evaluación de la contaminación de una muestra con Mycoplasma, e identificación de la especie contaminante
Introducción
La contaminación de sistemas de cultivo celular con Mycoplasma sigue presentando un importante problema para la investigación básica, así como para el desarrollo y fabricación de productos biológicos. Se ha demostrado que contaminaciones con Mycoplasma producen una variedad de efectos en células cultivadas (por ejemplo, cambios en el metabolismo, propiedades inmunológicas o bioquímicas, crecimiento, viabilidad, etc.). Puesto que normalmente la infección con micoplasma de cultivos celulares es una infección crónica que puede no ser detectada por inspección visual o microscopia común, es importante realizar evaluaciones periódicas de rutina con un método rápido y altamente sensible.
Han sido desarrolladas una gran variedad de pruebas para detectar Mycoplasma en cultivos celulares (por ejemplo, tinción de ADN con fluorocromos, monitoreo de metabolitos tóxicos, método de cultivo, etc.) pero cada método muestra ciertas desventajas. El principal inconveniente de los métodos es su falta de especificidad o un alto consumo de tiempo.
Metodología empleada
La metodología empleada para la detección de posibles contaminaciones con Mycoplasma es PCR-RT (PCR Real Time). Esta reacción es un proceso de amplificación por PCR y detección simultánea del ADN amplificado en “tiempo real”, pudiendo realizarse dicha detección por medio de diferentes elementos fluorescentes, tales como sondas o agentes intercalantes que evidencian la cantidad de ADN presente en cada ciclo de amplificación.
Las ventajas de la determinación mediante Real Time PCR son:
- Sistema homogéneo que evita la manipulación del amplificado, escapando al grave problema de contaminaciones con el mismo.
- Rapidez en la obtención de resultados.
- Amplio rango dinámico de detección.
- Alta sensibilidad.
- Mínima variabilidad en los resultados, dando una detección confiable y precisa.
Limite de detección
10 copias de ADN target / reacción
Tiempo de entrega de los resultados
7 días hábiles
Un servicio adicional que Cromátida ofrece es la identificación de la cepa de Mycoplasma con la que se encuentra contaminada su muestra.
Esto no solo es beneficioso a la hora de la elección de un tratamiento específico para la eliminación de la cepa contaminante, sino que permite a su vez poder evaluar la posible fuente de contaminación; por ejemplo Mycoplasma humano proveniente de los operarios ( M.fermentans ), Mycoplasma bovino proveniente de suero ( M.arginini ), etc…
Como ventaja global y de gran importancia cabe resaltar que todo lo anteriormente mencionado permite la evaluación y generación de una estrategia preventiva control y una modalidad de trabajo dentro de las diferentes áreas, que permita mejorar la calidad del trabajo y evitar futuras contaminaciones.
Tiempo de entrega de los resultados
14 días hábiles